怎样切除、拼接基因？

需要用到一些酶

首先是用于切哗桥好割，要用限制性核酸内切酶，高中学到的有两种，其一为EcoRI，是从大肠杆菌内提取的，识别GAATTC的碱基序消搜列并在GA处切割二酯键，切出的为粘性末端。其二为T4酶（从T4噬菌体内获得），切割CG间的二酯键，切出的是平末端。

接着是连接酶，有Ecoli和T4，乱铅前者连接所有粘性末端，后者都可连接，但效率较低。

什么是基因工程？它包括哪些主要步骤

基因工程（genetic engineering）又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生袭卖物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。第一步，获取目的基因。第二步，目的基因与运载体结合。第三步，将目的基因导入受体细胞。第四步，目的基因的检测与鉴定。

基因工程 *** 作过程的主要步骤有哪些

一，目的基因的获取。二，基因表达载体的构建。三，导入受体细胞。四，目的基因的检测与鉴定。

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基因工程的 *** 作过程的主要步骤包括哪些

提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与表达。

基因工程的 *** 作步骤

工具（1）酶：限制性核酸内切酶、DNA连接酶、（2）载体：质粒载体、噬菌体载体、Ti质粒、人工染色体1.提取目的基因获取目的基因是实施基因工程的第一步。如植物的抗病（抗病毒 抗细菌）基因，种子的贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因干扰素基因等，都是目的基因。要从浩瀚的“基因海洋”中获得特定的目的基因，是十分不易的。科学家们经过不懈地探索，想出了许多办法，其中主要有两条途径：一条是从供体细胞的DNA中直接分离基因；另一条是人工合成基因。直接分离基因最常用的方法是“鸟q法”，又叫“散d射击法”。鸟q法的具体做法是：用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞提供的DNA（即外源DNA）的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（在遗传学中叫做扩增，如使用PCR技术），从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来。如许多抗虫抗病毒的基因都可以用上述方法获得。用鸟q法获得目的基因的优点是 *** 作简便，缺点是工作量大，具有一定的盲目性。又由于真核细胞的基因含有不表达的DNA片段，一般使用人工合成的方法。人工合成基因的方法主要有两条。一条途径是以目的基因转录成的信使RNA为模版，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需要的基因。另一条途径是根据已知的蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对的原则，推测出它的基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。如人的血红蛋白基因胰岛素基因等就可以通过人工合成基因的方法获得。2.目的基因与运载体结合基因表达载体的构建（即目的基因与运载体结合）是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。将目的基因与运载体结合的过程，实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。如果以质粒作为运载体，首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。然后用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端（部分限制性内切酶可切割出平末端，拥有相同效果）。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处，首先碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起，碱基之间形成氢键，再加入适量DNA连接酶，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来，形成一个重组DNA分子。如人的胰岛素基因就是通过这种方法与大肠杆菌中的质粒DNA分子结合，形成重组DNA分子（也叫重组质粒）的。3.将目的基因导入受体搜禅扰细胞将目的基因导入受体细胞是实施基因工程的第三步。目的基因的片段与运载体在生物体外连接形成重组DNA分子后，下一步是将重组DNA分子引入受体细胞中进行扩增。基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌，枯世旦草杆菌，土壤农杆菌，酵母菌和动植物细胞等。用人工方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞，主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。例如，如果运载体是质粒，受体细胞是细菌，一般是将细菌用氯化钙处理，以增大细菌细胞壁的通透性，使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。目的基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的繁殖而复制，由于细菌的繁殖速度非常快，在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。4.目的基因的检测和表达目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。这是基因工程的第四步工作。以上步骤完成后，在全部的受体细胞中，真正能够摄入重组DNA分子的受体细胞是很少的。因此，必须通过一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检测。检测的方法有很多种，例如，大肠杆菌......

基因工程技术包括哪些基本步骤

目的基因的提取、基因表达载体的构建、把目的基因导入受体细胞、目的基因的鉴定与检测

denovo拼接需要参考基因组么

de novo assembly是新的基因组装配，（de novo 的意思是全新，assembly是序列拼接），即在没有参考序列的情况下进行序列拼接，对未知基因组序列进行测序，利用生物信息学分析手段，对序列进行拼接、组装，从而获得其基因组的图谱。但这是个相对的概念，比如谈铅如果有了人类基因组作参考，那拼chimpanzee的就不是de novo，而算ab initio。

此外还会有人对测序的覆盖度（coverage）和测序的深度（depth）概念混淆。

对于coverage，由于大片段拼接的gap（空白或者缺口）、测序读长有限、重复序列等问题的存在，测序分析后组装得到的基因组序列通常无法完全覆盖所有区域，覆盖度就是最终得到的结果占整个基因组的比例。例如一个人的基因组测序，覆盖度为98.5%，那么说明该基因组还有1.5%的区域通过我们的组装和分析无法得到；

对于depth，就是被测基因组上单个碱基被测序的平均次数，比如某样本的测序深度为30X，那么就是说该样本的基因组上每一个单碱基平均被测序（或者说读取）了30次，注意，是平均。当然了，depth也有最大和最小值，这个都可以由信息分析得到。其实也就是为了提高准确率什么的，一般15X就差不多了。

测序结果怎么拼接

测序实际上就是一个PCR反应。两个反应就是以上有引物引发和下游引物引发的两个反应。

测序结果拼接其实很简单，你看你的两个测序结果的后面应该有一段重叠区此侍禅（如果测通的话），通过重叠区拼接起来就可以了。

DNAman里可以自动拼接的。

你说的那几个软件在百度文档里就有下载。

我手头有mage、DNAstar和ClustralX的使用说明。

基因片段用什么拼接？怎样拼接？ 10分

粘性末端法,又称限制性内切酶酶切法。要求两种DNA分子具备同一个限制性内切酶切点,能产生互补的粘性末端。主要缺点是较难选择重组质粒,而且当外源DNA片段的长度超过载体DNA较多时,形成的重组质粒的转化率较低

如何拼接DNA序列

DNA序列的拼接应该是从测序结果中，准确找到你的序列信息。

一般是以自身的引物去查找搜索，先确定引物的位置，那么引物两端便是你想要的序列。

如何将线粒体全基因组dna进行环状拼接

线粒体拥有自身的遗传物质和遗传体系，但其基因组大小有森尘限，是一种半自主细胞器。除了为细胞供能外，线粒体还参与诸如细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程，并拥有调控细胞生长和细胞周期的能力。

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