什么是HIV

HIV

艾滋病，既获得性免疫缺陷综合症（ AIDS ），是由人类免疫缺陷病毒（ HIV ）引起的一种免疫缺陷性疾病。到 2002 年 6 月底全球已有 6000 万人感染了 HIV ，其中 2000 万人已被艾滋病夺去生命，艾滋病正已每天 1.4 万人受感染的速度扩大流行，目前该病尚无法治愈，也无有效疫苗。截止到 2003 底我国 HIV 感染者已近 84 万，进入了快速增长期，据有关专家估计，如不采取积极有效的控制措施，到 2010 年我国 HIV 感染者将达 1000 万，形势十分严峻。 HIV 感染的诊断是艾滋病预防控制工作的重要组成部分，只有发现传染源才能更有效地控制艾滋病传播。通过检测 HIV 的特异性抗体、抗原、核酸或病毒分离培养可确立 HIV 感染， WHO 和我国卫生部推荐使用的 HIV 感染诊断方法是血清学抗体检测。。

一、 HIV 检测的特殊性

HIV 检测不同于其他病原微生物检测，要求十分严格，任何错误的诊断，包括假阳性或假阴性，都会对被检者产生十分重要的影响。因此， HIV 检测必须严格按照国家制定的《艾滋病检测工作管理办法》和《艾滋病检测技术规范》（以下简称《规范》）进行，检测的实验室须经当地卫生行政部门审批合格，从事艾滋病检测工作的技术人员须接受专门的技术培训，并获合格证书，诊断试剂应选择高敏感和高特异的，筛查呈阳性反应的需用特异性更强的方法（如：免疫印迹试验）进行确认，整个实验过程应有严格的质量保证体系。

二、 HIV 抗体检测

目前国外用于 HIV 抗体筛查的方法很多，根据检测原理不同分为酶联免疫吸附法、凝集法和层析法，可对血液、唾液和尿液标本进行常规或快速检测。在实际工作中常用的有酶联免疫吸附试验（ ELISA ）、明胶凝集试验和各种快速诊断试剂。自 1985 年第一代 ELISA 试剂问世以来，随着医学技术的飞速发展，包被抗原已从一代的全病毒裂解物发展为目前以基因重组和多肽抗原包被和标记、有着良好敏感性和特异性的三代双抗原夹心试剂，检测亚型包括 HIV-1 、 HIV-2 和 HIV-1 型的 O 亚型，窗口期由 10 周缩短至 3-4 周。为避免窗口期传染，荷兰、法国等国已研制出第四代以重组的多肽抗原和抗 P24 抗体包被的双抗原夹心法试剂盒，可同时检测抗原抗体，使窗口期缩短了 2-3 周，但其临床价值有待评估。按《规范》要求，我国采供血机构进行血液筛查和各医疗卫生机构常规筛查检测宜采用 ELISA 法，自采自供血的单位必须进行 HIV 抗体检测，在尚未建立艾滋病筛查实验室的偏远地区或大医院急诊手术前可由经过培训的技术人员在规定的场所用快速试剂进行血液筛选。对用 ELISA 试剂或快速诊断试剂进行的筛查实验如呈阴性反应，即报告 HIV 抗体阴性；对呈阳性反应的标本，筛查实验室应用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的试剂进行重复检测，如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告 HIV 抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认。筛查试剂必须是 HIV-1/2 混合型、经国家药品监督管理局（ SDA ）注册批准、批批检合格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。

HIV 抗体筛查呈阳性反应的标本由于存在假阳性的可能，必须做确认试验。国际上有 3 种确认试验方法，包括免疫印迹试验、条带免疫试验及免疫荧光试验，目前以免疫印迹试验最为常用。确认试剂必须经 SDA 注册批准。免疫印迹试剂有 HIV-1/2 混合型和单一型，按《规范》要求，一般先用 HIV-1/2 混合型试剂进行检测，根据《规范》中判定免疫印迹试验结果的基本原则并参照所用试剂说明书综合判定，无 HIV 抗体特异带出现的报告 HIV 抗体阴性；出现 HIV 抗体特异带，符合 HIV-1 抗体阳性判定标准，则报告 HIV-1 抗体阳性。如出现 HIV-2 型的特异性条带，需用 HIV-2 型免疫印迹试剂再做单一的 HIV-2 型抗体确认试验，呈阴性反应，报告 HIV-2 抗体阴性；呈阳性反应的则报告 HIV-2 抗体血清学阳性，如需鉴别应进行核酸序列分析。如果出现 HIV 抗体特异带，但带型不足以判定为阳性，则判为 HIV 抗体不确定。对 HIV 抗体不确定者应按《规范》要求进行随访，必要时可做 HIV-1 P24 抗原或核酸测定，但检测结果只能作为辅助诊断依据，确认报告要依据血清学随访结果。

由于目前唾液检测试剂的敏感性和尿液检测试剂的特异性明显低于血液检测试剂，故我国 SDA 已注册批准的 HIV 抗体筛查和确认试剂只能用于血液标本检测。

三、 HIV 抗体检测的质量控制

在所有实验中必须包含有内部对照质控血清和外部对照质控血清。

内部对照质控血清指试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清。内部对照是质量控制的基础，每次检测必须使用内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。

外部对照质控血清是由实验室设置的弱阳性对照，一般以该试剂盒临界值（ Cut off ）的 2-3 倍为宜。该血清可到专门单位购买，也可由实验室自己制备。制备方法是：收集 HIV 抗体阳性和阴性血清， 56 ℃ 30min 灭活， 3000rpm 离心 15min ，弱阳性对照可以用 HIV 抗体阴性的健康人血清梯度稀释 HIV 抗体强阳性血清、或用试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清混合并标定后得到，一般按一年使用量配制，用 0.2 μ m 滤膜过滤除菌，按一周实验用量分装、分类、标记并封口， -20 ℃ 冻存。该血清不可反复冻融，融化后应存放 2 -8 ℃ ，一周内使用。原则上每次实验必须使用外部对照质控 血清，以便监控本次实验的重复性和稳定性，同时了解各批试剂盒的批间差异，绘制质量控制图。

四、 HIV-1 P24 抗原检测

HIV 感染人体后有一段窗口期，在这段时期病毒抗体不能被检出，但可以检测到病毒相关抗原或分离病毒。故在窗口期检测抗原是早期辅助诊断和缩短窗口期的一种方法，在感染早期和发病期抗原检出率相对较高。 HIV-1 P24 抗原检测还适用于： HIV-1 阳性母亲所生婴儿的早期辅助鉴别诊断；第四代 HIV-1 抗原 / 抗体 ELISA 试剂检测呈阳性反应、但 HIV-1 抗体确认阴性者的辅助诊断；监测病程进展和抗病毒治疗效果。

P24 抗原检测一般用 ELISA 双抗体夹心法试剂，必须经过 SDA 批准注册。

HIV-1 P24 抗原的阳性结果必须经过中和试验确认 , 该结果仅作为 HIV 感染的辅助诊断依据，不能据此确诊； HIV-1 P24 抗原检测阴性只表示在本试验中无反应，不能排除 HIV 感染。

五、 HIV 核酸检测

HIV 核酸检测，通常是检测 HIV RNA ，以前只能定性检测血液中是否存在病毒核酸，而目前的技术可定量检测血液中病毒复制水平。 HIV 核酸定性检测可用于 HIV 感染的辅助诊断，如窗口期辅助诊断、病程监控、指导治疗方案及疗效测定、预测疾病进程等。通常使用 PCR 或 RT-PCR 技术，使用分子生物学实验室通用的扩增试剂，引物可来自文献或自行设计，应尽量覆盖所有或常见的毒株，也可使用复合引物。 HIV 核酸定量检测多用于监测 HIV 感染者的病程进展和抗病毒治疗效果，目前常用的测定方法有逆转录 PCR 实验（ RT-PCR ）、核酸序列扩增实验（ NASBA ）、分支 DNA 杂交实验（ bDNA ）等。在不同 HIV 定量检测方法的选择中，由于目前用于统一不同定量方法检测值的标准品尚未问世，因此不同定量方法结果之间还无法直接进行比较，建议同一病人治疗前后用同一方法进行 HIV 定量检测。

值得注意的是， HIV 核酸定性检测阴性，只可报告本次实验结果阴性，但不能排除 HIV 感染； HIV 核酸检测阳性，可作为诊断 HIV 感染的辅助指标，不能单独用于 HIV 感染的诊断，报告定性检测结果时还应注明反应条件和所使用的引物序列。报告 HIV 核酸定量检测结果时应按照仪器读数报告结果，注明使用的试验方法、样品种类和样品量，当测定结果小于最低检测限时，应注明最低检测限水平，低于最低检测限的结果不能排除 HIV 感染。

六、 CD4 T 淋巴 细胞计数

CD4 T 淋巴细胞计数是艾滋病诊断、疾病分期、制定抗病毒治疗和预防机会性感染方案的实验室标准指标，美国 CDC1993 年修订的青年 / 成人艾滋病监测病例分类及扩大的诊断标准是：无症状 HIV 感染期（ A 1 、 A 2 ）： CD4 绝对数≥ 500/mm 3 或 CD4 百分率≥ 29% ；有症状感染期（ B 1 、 B 2 ）： CD4 绝对数 200-499/mm 3 或 CD4 百分率 14-28% ； AIDS 期（ A 3 、 B 3 、 C 1-3 ）： CD4 绝对数＜ 200/mm 3 或＜ 14% 。 CD4 T 淋巴细胞计数也是与病毒载量相配合预测疾病进程的可靠指标，这两个实验可以相互独立预测艾滋病临床过程和生存期。检测 CD4 细胞数的标准方法是流式细胞仪。影响 CD4 细胞数的因素有季节、昼夜差、某些并发症和皮质醇类药物等，而性别、成人年龄、紧张、生理性应激和妊娠对 CD4 的细胞数影响不大。由于 CD4 百分数受变异影响较绝对数小，故 CD4 细胞百分率有时比绝对数对临床更有意义。

七、病毒变异和耐药性的测定

随着 HAART 治疗的广泛开展，病毒变异和耐药株正在不断出现，甚至对一个药物的耐药可引起多种药物的交叉耐药。因此近年来各国相继建立起病毒变异和耐药的测试方法，目前常用的方法包括基因型 HIV 耐药测试和表型 HIV 耐药测试。 表型 HIV 耐药性测试方法能直接测出 HIV-1 对药物的敏感度，并能揭示事先存在或交叉的耐药情况，有利于指导 HIV-1 感染者有效地用药。目前市面上供应试剂盒已有 2 种，即 AV （ Vicro Antivirogram ）和 PS （ Virologic PhenoSense ），两者方法均应用从生长于载体中的 HIV-1 而获得的重组病毒和病人标本中蛋白酶与逆转录酶序列，分析与野病毒之间 IC50 值相差倍数，一般达 5—10 倍以上为阳性。这种方法的最大优点是可以获得各种药物耐药量度数据，但不足的是试验慢又昂贵，技术要求高。当病毒对某些药物产生耐药性时，病毒基因会发生一些明确的突变。病毒耐药基因型的检测有助于预测某些药物的治疗效果。基因型 HIV 耐药性测试方法是通过从病人血液标本中分离到的 HIV 基因物质，应用核酸酸序列分析或杂交技术以确定病毒变异的位点，并可参考已有数据库按不同亚型进行比较。在确认变异后，与既往耐药或交叉耐药研究比较，间接地估计药物耐药情况，简单快速，费用低。缺点是能确认所分离到的基因变异，但无法指出药物耐药的程度。

应当强调的是，我国自 1995 年进入艾滋病流行的快速增长期，感染者中约 70% 为经静脉吸毒等血液途径感染，按艾滋病自然病程，近 1-2 年将会出现艾滋病的发病高潮，医院系统所承担的艾滋病检测工作将愈来愈重，因此各医院检验科应严格按《规范》要求，通过 HIV 抗体筛查和确认试验提供准确的 HIV 感染诊断，通过 CD4 T 淋巴细胞计数和 / 或 HIV 核酸定量检测为艾滋病诊断、判断疾病进展和抗艾滋病治疗疗效观察提供可靠的实验室数据。

根据标准参考数据计划，NIST的各实验室正在将他们的数据库产品不断加入到在线访问的数据库行列，建立了一系列的科学数值数据库。通过更新现有的数据库及开发新数据库，NIST不断地丰富它的评价数值数据集，为社会提供可靠的、经过评价的数值数据。社会各界的工程师和科学家依靠 NIST的标准参考数据对许多关键技术进行决策。

NIST的标准参考数据库系列包括50多个数据库，其中大部分是建在微机上的多用途数据包，根据学科可分为以下几类：分析化学（包括谱学），原子和分子物理，生物技术，化学与晶体结构，化学动力学，工业流体与化工，材料性能，热力学与热化学，以及NIST的其它数据库。

分析化学类包括质谱库、红外谱、光电子能谱等数据库；原子与分子物理类包括光谱性能、c-射线衰减系数及交叉截面、原子光谱等数据库；生物技术类包括生物大分子结晶库等数据库；化学与晶体结构类有电子衍射等数据库；化学动力学类包括化学动力学、溶液动力学等数据库；工业流体与化工类有物质的热力学性能数据库；材料性能类包括结构陶瓷、腐蚀性能、摩擦材料、高温超导等数据库；表面数据类包括表面结构、d性电子散射交叉截面等数据库；热化学类包括化学热力学、有机化合物热力学性能估算、JANAF热化学表等数据库。

NIST提供科学数值数据服务的方式主要有：①将数据与分析仪器连在一起出售，如质谱库中有近10万个化合物数据，附在质谱仪中出售的有常用的几万个化合物；②以PC数据包方式出售；③联机数据服务；④作为其它大的软件包的一部分；⑤直接装入用户的计算机。

具体的在线科学数据库名单如下：

儿童人体测量数据库（AnthroKids - Anthropometric Data of Children），

铂/氖阴极管灯泡的光谱图（Atlas of the Spectrum of a Platinum/Neon Hollow-Cathode Lamp in the Region 1130-4330 &Aring），

用于电子结构计算的原子参考数据库（Atomic Reference Data for Electronic Structure Calculations），

原子光谱数据库（Atomic Spectra Database，ASD），

原子谱线加宽目录数据库（Atomic Spectral Line Broadening Bibliographic Database），

原子跃迁概率数据库（Atomic Transition Probability Bibliographic Database），

原子重量及同位素成分数据库（Atomic Weights and Isotopic Compositions），

光子总交叉截面（衰减系数）测量目录（Bibliography of Photon Total Cross Section (Attenuation Coefficient) Measurements），

生物高分子结晶数据库（Biological Macromolecule Crystallization Database），

陶瓷互联网手册（Ceramics WebBook），

化学动力学数据库（CKMech，Chemical Kinetic Mechanisms），

化学互联网手册（Chemistry WebBook），

单分子反应计算数据库（ChemRate: A Calculational Database for Unimolecular Reaction），

视觉协同测试床（CIS2 Visual Interoperability Testbed），

化学动力学机理（CKMech，Chemical Kinetic Mechanisms），

计算化学比较和基准数据库（Computational Chemistry Comparison and Benchmark Database），

计算机辨认工具测试项目网站（Computer Forensics Tool Testing (CFTT) Project Web Site），

二阶光谱数据库（Diatomic Spectral Database），

运算法则和数据结构字典（Dictionary of Algorithms and Data Structures），

电子与等离子体加工用气体相互作用数据 (Electron Interactions with Plasma Processing Gases），

元素数据索引（Elemental Data Index），

工程统计学手册（Engineering Statistics Handbook），

火灾研究信息服务（Fire Research Information Services ，FRIS），

基本物理常数（Fundamental Physical Constants），

中性原子的基本水平和电离能量（Ground Levels and Ionization Energies for the Neutral Atoms），

数学软件指南（Guide to Available Mathematical Software），

NIST计量结果不确定性的评估与表达指南（Guidelines for Evaluating and Expressing the Uncertainty of NIST Measurement Results），

基础原子光谱数据手册（Handbook of Basic Atomic Spectroscopic Data），

绝缘体和建筑材料的热传递性质（Heat Transmission Properties of Insulating and Building Materials），

高温超导材料数据库（High Temperature Superconducting Materials Database），

HIV蛋白酶数据库（HIV Protease Database），

人线粒体蛋白数据库（Human Mitochondrial Protein Database），

烃类光谱数据库（Hydrocarbon Spectral Database），

二氧化碳同位素测定的交互规则（Interactive Algorithm for Isotopic CO2 Measurements），

国际比较数据库（International Comparisions Database），

ITS-90热电偶数据库（ITS-90 Thermocouple Database），

自动数据分析工具（MassSpectator Automated Data Analysis Tool），

矩阵市场数据库（Matrix Market Database），

相位图和计算热动力学―焊接系统（Phase Diagrams and Computational Thermodynamics - Solder Systems），

多轮烃结构索引（Polycyclic Aromatic Hydrocarbon Structure Index），

聚合物方法数据库（Polymer MALDI MS Methods Database），

高级材料的性质数据总结（Property Data Summaries for Advanced Materials），

断裂韧度性质数据总结（Property Data Summaries for Fracture Toughness），

氧化玻璃的性质数据总结（Property Data Summaries for Oxide Glasses），

蛋白质数据银行（Protein Data Bank (PDB) ( in collaboration with RCSB )

放射性核半衰期计量（Radionuclide Half-Life Measurements），

用于观测星际分子微波跃迁的雷达技术扫描频率（Recommended Rest Frequencies for Observed Interstellar Molecular Microwave Transitions - 1991 Revision），

加强渗透性数值数据库（Database on Reinforcement Permeability Values），

短暂前后重复的DNA数据库（Short Tandem Repeat DNA Internet Database），

无铅焊料的焊接特性数据库（Database for Solder Properties with Emphasis on New Lead-free Solders），

可溶性数据库（IUPAC-NIST Solubility Database），

溶解动力学数据库（NDRL/NIST Solution Kinetics Database on the Web），

坎德拉X-射线天文台光谱数据库（Spectral Data for the Chandra X-ray Observatory），

统计参考数据库（Statistical Reference Datasets），

电子、质子和氦离子的静止能与行程表（Stopping-Power and Range Tables for Electrons,Protons,and Helium Ions），

NIST结构陶瓷学数据库（NIST Structural Ceramics Database），

合成聚合物质谱项目（Synthetic Polymer Mass Spectrometry Project），

X-射线质量衰减系数和能量吸收系数表（Tables of X-Ray Mass Attenuation Coefficients and Mass Energy - Absorption Coefficients），

酶催化反应的热力学数据库（Thermodynamics of Enzyme-Catalyzed Reactions Database），

半导体器件加工用的气体的热物理特性数据库（Database of the Thermophysical Properties of Gases Used in the Semiconductor Industry），

三原子光谱数据库（Triatomic Spectral Database），

Vibrational branching ratios and asymmetry parameters in the photoionization of CO2 in the region between 650 &Aringand 840 &Aring

可见物粘合剂数据集（NIST Visible Cement Dataset），

Wavenumber Calibration Tables from Heterodyne Frequency Measurements

用于剂量测定的X-射线衰减与吸收表（X-Ray Attenuation and Absorption for Materials of Dosimetric Interest），

X-射线波型系数、衰减与散射表（X-Ray Form Factor,Attenuation and Scattering Tables），

X-射线电光子分光光谱数据库（NIST X-ray Photoelectron Spectroscopy Database），

X-射线跃迁能量数据库（X-Ray Transition Energies Database），

光子交叉截面数据库（XCOM: Photon Cross Sections Database）。

人类离攻克艾滋病还是挺远的。

全球第二例艾滋病自愈者出现， 这件事情的具体经过是怎样的？

美国哈佛大学和麻省理工学院的医学研究团队发现了第二个未经治疗就康复的艾滋病患者，科学家称这是清除性治愈。意味着当体内的病毒不断复制传播时，自身免疫系统可以停止病毒的复制，将其降低到相对较低的水平。

这种情况只是特例

自1981年艾滋病正式命名以来，全球感染人数已达数千万，但目前仅发现2名自愈者。就现实而言，这个自愈的艾滋病患者非常罕见。不仅如此。科学家还认为，尽管在自愈者检查的人体细胞中没有发现艾滋病毒，但这并不意味着身体其他部位没有活跃的潜伏病毒。

艾滋病的治疗仍然需要以药物控制为重点

对于已经感染艾滋病的患者来说，目前药物控制仍然是重中之重。通过间歇性药物治疗，艾滋病毒的危害降到最低，成为一种慢性病。虽然没有办法彻底治愈艾滋病，但只要听从医生的安排，坚持治疗，合理运动，就能把艾滋病的并发症降低到最低概率。

人类离攻克艾滋病还远吗？

这意味着艾滋病无法治愈。也许在未来，艾滋病会像感冒一样可以治愈。艾滋病感染HIV后，会导致细胞不断复制病毒，从而形成病毒数据库。在这种情况下，病毒可以迅速逃脱HIV药物和免疫细胞的控制。因此，目前医疗技术无法通过药物控制病毒，它们会产生杀伤性T细胞，这些细胞会逐渐战胜HIV病毒，因此无需药物治疗就能控制疾病。到目前为止，世界上只有两个病人被发现有杀伤T细胞。如果这种细胞能用于其他艾滋病患者，或许真的能达到治愈的目的。

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