怎么把电脑和打印机连接，用的是TP-LINK WDR4320路由器，打印机和路由器连接

正常情况下没有网络打印功能的打印机是只能在一台电脑提供服务器的情况下才能实现网络打印功能。不过现在的高端路由器已经可以实现这样的打印机实现网络打印功能，是利用路由器充当服务器，提供USB接口来连接打印机实现网络打印功能，还有专用的打印机网络共享服务器配件，同路由器一样大小价格低廉。TP-Link WDR4320路由器提供了USB接口并带有打印机的网络打印功能，因此没有网络打印功能的打印机可以通过WDR4320路由器连接实现网络打印功能，这需要进入路由器设置页面给打印机分配IP地址，先连接打印机分配IP地址再安装打印驱动，驱动安装完成后在搜索打印机时可选择网络打印机，具体如何设置，在WDR4320的说明书上有图文说明，在此略去。不过不管是是否提供网络打印功能的打印机，都需要在电脑端安装相应的打印机驱动程序才能实现网络打印！

摘　要：WD40重复序列蛋白是一类结构保守、功能复杂的蛋白。关于此类蛋白和细胞内信号传导途径的研究显示，该家族成员很可能通过调控胞内信号转导而影响细胞基本生命活动。在此前的研究中，我们报道了一个新基因WD40 repeatprotein 26的克隆。其初步研究结果显示WDR26蛋白与MAPK信号途径的负调控相关。在最近的研究中，我们构建了稳定转染pCMV－WDR26表达载体的HeLa细胞系，结果显示WDR26蛋白在HeLa细胞系中的过度表达，能够促进细胞分裂，加快细胞的倍增速度。因此，WDR26很可能具有通过MAPK信号途径调节细胞增殖的功能。

关键词：WDR26蛋白；MAPK信号途径；细胞增殖

中图分类号：Q753

文献标识码：A

文章编号：1007-7847(2006)02－0123－05

WD40重复序列蛋白(WDR)家族的成员广泛地存在于真核生物中，其中研究最为深入的是G蛋白的β亚基(Cβ)。此类蛋白以4～16个保守的WD重复序列为家族结构标志。一个典型的WD重复序列由大约40个氨基酸组成，包括氨基端的GH、羧基端的WD和以Trp-Aspmotif为核心的中间序列。结构分析说明，该家族成员具有保守的序列及空间结构，WD40蛋白质家族之所以广受关注，不仅因为引人注目的保守性空间结构，而且因为这一庞大家族所具有的异乎寻常的功能多样性――其成员在真核生物中广泛存在，影响着细胞生命活动的方方面面。参与信号传导过程的WDR蛋白，除了研究得最为详尽的Gβ外，还有磷酸化酶亚基、蛋白激酶C的锚定蛋白以及多个信号途径的调控因子，如hPIP2等。在RNA合成过程中，一些WDR蛋白是snRNP颗粒的组成部分。而作为转录调控因子的WDR蛋白则包括TATA-box结合复合体的TFIID亚单位。此外该家族成员还涉及从细胞骨架构建、纺锤体组装、小泡形成和运输，到细胞分裂的调控及霉菌中硫代谢的调控等细胞生命活动。

在此之前，我们报道过关于WDR家族一个新成员WD40 repeat protein 26(WDR26)的初步研究工作。其结果显示WDR26蛋白具有高度进化保守性。该蛋白包含5个WD40重复序列，与该家族成员――PAK抑制蛋白hPIP1具有相似的蛋白结构。表达分析说明WDR26在成体和胚胎期的多数组织中都有表达，因此很可能与多类细胞的基本生命活动相关。而进一步的转录激活活性分析显示，该蛋白能够抑制有丝分裂活化蛋白激酶(MAPK)信号途径的效应因子――SRE和Elk－1的转录活性，很有可能对MAPK信号途径起到负调控作用。

MAPK信号途径是细胞信号传导过程的重要组成部分。目前的研究表明，MAPK将G蛋白耦联的受体等膜转导蛋白与其细胞内的关键调控靶蛋白联系起来，从而介导胞外的多种信号，如胰岛素信号、表皮生长因子等，并将这些信号级联放大后传递给相应的下游因子，通过激活包括SRE、ELK-1、c-Jun、c-fos、MEF2、ATF2，等在内的多种转录因子，最终开启细胞特定功能基因的表达，从而调控细胞的生存及对外界的适应能力。在对细胞增殖的调节中，MAPK表现出正负两方面的调节活性。ERKl／2可通过氨基甲酰磷酸合成酶Ⅱ(一个嘧啶合成限速酶)的磷酸化作用来刺激DNA的合成。此外，ERK很有可能通过一些MAP―KAPK，如细胞周期抑制性激酶MYTl，来促进细胞周期进程。同时也可以通过激活蛋白激酶p90Rsk使减数分裂细胞停留在分裂Ⅱ中期。ERK还可以通过激活APl活性，诱导产生细胞周期蛋白D1，从而间接刺激细胞增殖。

基于WD40家族的保守性结构特征，其家族成员(如C蛋白β亚基，hPIPl)的重要生物学功能，以及此前研究结果所揭示WDR26的基本特性以及它与MAPK信号途径的潜在关系，我们相信该蛋白在细胞的基本生命活动中起着重要的调控作用。因此，在本文中我们进一步分析WDR26对于细胞增殖过程的影响。

1　材料和方法

1．1　细胞培养、细胞生长计数与流式细胞仪分析

生物安全柜及CO2培养箱(37℃／5％ CO2)均购自Forma公司。含氨苄青霉素(100mg／L)(BBl)和链霉素(100mg／L)(BBl)以及10％胎牛血清(杭州四季青公司)的DMEM培养基(GIBICBRL)，PBS(GIBIC BRL)，胰酶(0．05％)(GIBICBRL)，G418(Clontech)等分别用去离子水配制并按相应要求灭菌或滤菌。细胞复苏、接种、传代、冻存均按常规 *** 作进行。

将HeLa细胞接种于DMEM培养基(无抗生素，无胎牛血清)的10cm细胞培养皿中，培养过夜。使用磷酸钙转染方法进行pCMV-WDR26以及对照质粒pCMV(均为10μg)的转染。将100μL2．5mol／LCaCl2与25μg质粒DNA在室温下混合；用移液器将等体积的2×HEPES盐溶液吹打起泡后，将以上2×钙-DNA溶液逐滴加入，静置1min；将磷酸钙－DNA悬液转移至上述单层细胞的培养基中，培养过夜。除去培养基，用1×PBS洗细胞两次，更换含氨苄青霉素和链霉素以及10％胎牛血清的DMEM培养基，并使用300、200、100mg／L的梯度浓度进行G418的筛选，3d更换一次培养基。稳定转染pCMV-WDR26的HeLa细胞，使用含100mg／L浓度G418的DMEM培养基维持，实验时接种于24孔板(每孔1×104个细胞)，分别于接种后48、72、96、120h将细胞用胰酶消化，并按1：10或者1：100稀释后进行细胞数目计数。使用标准细胞计数板，每次计算10个方格的细胞总数×1000二细胞数目／mL。每次计数取3个样品，重复实验3次，取平均值，绘制细胞生长曲线，计算细胞倍增时间。

按照上述方法接种稳定转染pCMV-WDR26的HeLa细胞系于6孔板，每孔1×106个细胞，培养过夜后将细胞用胰酶消化法收获，并离心后进行流式细胞仪分析。

1．2 抗原簇的位点分析与抗体的制备及纯化

WDR26抗原簇位点分析使用DNAstar软件进行。将0．8mg抗原肽溶于0．5mL生理盐水中，先与弗氏佐剂(购自Sigma公司)在注射器中推成乳剂(1：1)，在第1d和第3d分别对新西兰大白兔(购自中南大学湘雅医学院)进行背部皮下免疫注射，分散10～20个点；在第28d再将溶于0．5mL生理盐水中的0．8g抗原肽与非完全弗氏佐剂(购自Sigma公司)在注射器中推成乳剂(1：1)，第3次进行背部肌肉多点注射，第30天取血。兔血放在4℃冰箱中静置过夜，以3 000r／min离心10 本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 min，取血清分装保存于－80℃下。通过印记亲和吸附法纯化抗体。

1．3 Western Blotting

收获一个10cm细胞培养皿(细胞密度80％)中的细胞，使用MRCgene公司的试剂盒一次性制备蛋白质、DNA和RNA( *** 作步骤按公司说明进行)。蛋白质浓度测定按照Bradford方法进行。

按照标准程序制备10％SDS―聚丙烯酰胺凝胶，取10μL(50／xg)蛋白样品溶液，用等体积的2μSDS凝胶加样缓冲液稀释，95℃水浴3min，以使蛋白质变性，按顺序用微量注射器点样，接通电源，恒压96V电泳，溴酚蓝跑过积层胶后，恒定电压150V。直到溴酚蓝迁移到距胶的底部1cm处时，即停止电泳。

PVDF膜(购自Millipore公司)依次用甲醇预处理15s，去离子水浸润5min，转膜缓冲液浸润5～10min。使用半干电转法(北京六一仪器厂，DYCP-40C)把蛋白质转到PVDF膜上，稳流80mA(2．5 mA／cm2)，电转1．5～2．0h．凝胶经考马斯亮蓝染色，膜经1×丽春红染色，以确认转膜效果。在膜上作好标记后，用TBST漂洗数次，除去丽春红。

实验前用TBST(含1％脱脂奶粉)将膜在4℃下封闭过夜(缓慢摇动)。用TBST的稀释一抗(WDR26特异性多克隆抗体，1：10／His－Tag单克隆抗体，1：1 000，Novageu)将以上制备的膜在室温下孵育2h。膜用TBST漂洗3次，每次20min。用TBST稀释的二抗(HRP耦联的羊抗兔IgG单克隆抗体／HRP耦联的羊抗鼠IgG单克隆抗体，Santa Cruz Biotechnology)按1：1500稀释后，将膜孵育1h；TBST漂洗3次，每次20min；TBS漂洗30min。用新配制的按1：50稀释的DAB(Amresco，E885)显色20min(按照产品说明进行)，得到较好的信号-背景对比效果后用TBS中止反应。

2　结果与讨论

2．1 抗原簇的位点分析与抗体的制备

WDR26抗原簇位点分析使用DNAstar软件进行，结果如图1．其中亲水性较高、与家族基因的同源度较小的一段表面肽段(120aa－140aa)被选用作为抗原。我们利用化学合成的多肽为抗原，制备了WDR26的多克隆抗体，并利用抗原吸附的方法对血清进行了纯化。

2．2 pCMV-WDR26稳定转染细胞系的鉴定

为了对WDR26进行进一步研究，我们用该抗体对稳定转染pCMV-WDR26的HeLa细胞系进行了鉴定。将从稳定转染pCMV-WDR26的HeLa细胞系及稳定转染pCMV的对照细胞系中提取的总蛋白转印到PDFV膜上，再分别用纯化后的WDR26特异性抗体和anti-Flag单克隆抗体对其进行Westernblot分析(图2)。结果说明该纯化抗体表现出较好的特异性，从而证明了稳定转染pCMV-WDR26的细胞系已经成功建立。在pCMV-WDR26稳定转染的细胞系中，WDR26的表达明显强于对照细胞系中WDR26的表达。这说明HeLa细胞中存在内源性WDR26蛋白，而我们转染的质粒则增强了这一蛋白的表达。

2．3 WDR26对细胞生长的影响

如前所述，MAPK信号途径在细胞的生长过程中起着重要的调节作用。考虑到WDR26对该信号途径潜在的抑制作用，我们希望知道它对于细胞生长是否也有一定的影响。我们分别建立了稳定转染pCMV-WDR26的HeLa细胞系，并建立pCMV的稳定转染HeLa细胞系作为对照。通过对这两个细胞系进行生长计数并绘制出细胞生长曲线(图3)，24h之后，稳定转染pCMV-WDR26的HeLa细胞系的数目就已经达到对照组的两倍，并且这样的生长速度一直持续到120h之后。这一结果说明WDR26的过度表达加快了HeLa细胞的倍增速度，使其倍增时间有一定程度的缩短。进一步的流式细胞仪分析结果也表明过量表达WDR26蛋白使停留在分裂相的HeLa细胞数目增多(图4)，这说明WDR26具有促进细胞分裂的作用。

综上所述，我们初步认为WDR26蛋白对细胞的增殖有一定的促进作用。MAPK信号途径对细胞增殖和凋亡的调节依赖于一个复杂的调控网络。虽然多数研究结果表明该途径的激活可以促进细胞生长，但对于细胞生存，MAPK具有正负两方面的调控活性，例如Ras，ERK的激活因子被发现可以促进细胞凋亡，而WDR26蛋白――具有Gβ的类似结构，以及对MAPK信号途径潜在的负调控作用――能够促进细胞分裂，加速细胞的增殖过程。那么，WDR26与MAPK信号途径的关系，该蛋白与Gβ在信号传导调控中的相互关系都值得进一步地深入探讨。

致谢：感谢湖南师范大学生命科学学院刘筠教授实验室提供流式细胞仪! 本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文

正常情况下没有网络打印功能的打印机是只能在一台电脑提供服务器的情况下才能实现网络打印功能。不过现在的高端路由器已经可以实现这样的打印机实现网络打印功能，是利用路由器充当服务器，提供USB接口来连接打印机实现网络打印功能，还有专用的打印机网络共享服务器配件，同路由器一样大小价格低廉。TP-Link WDR4320路由器提供了USB接口并带有打印机的网络打印功能，因此没有网络打印功能的打印机可以通过WDR4320路由器连接实现网络打印功能，这需要进入路由器设置页面给打印机分配IP地址，先连接打印机分配IP地址再安装打印驱动，驱动安装完成后在搜索打印机时可选择网络打印机，具体如何设置，在WDR4320的说明书上有图文说明，在此略去。不过不管是是否提供网络打印功能的打印机，都需要在电脑端安装相应的打印机驱动程序才能实现网络打印！

以上就是关于怎么把电脑和打印机连接，用的是TP-LINK WDR4320路由器，打印机和路由器连接全部的内容，包括:怎么把电脑和打印机连接，用的是TP-LINK WDR4320路由器，打印机和路由器连接、G0期细胞的重新增殖【Gβ类似蛋白－WDR26对细胞增殖的影响】、怎么设置WDR4320路由器不用电脑就能共享打印机（不是网络打印机）的呢等相关内容解答，如果想了解更多相关内容，可以关注我们，你们的支持是我们更新的动力！